婴幼儿食品行业所发生的一起起安全事故再次告诫人们：婴幼儿食品安全监控时刻不能松懈。
不同浓度的PQQ均在3.56 min左右出峰。通过在 NCBI网站中进行同源性序列搜索及比对，从中选取同源性较高菌株的16s rDNA基因序列，以集团外菌种作对照，通过MEGA软件，用邻接法（Neighbor-Joining）构建系统发育树。
如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除相关链接：硝酸盐，蛋白胨，葡萄糖。综合菌落及菌体形态特征、16s rDNA序列分析，鉴定该菌株为Methylopila sp.菌株，命名为Methylopila sp.Z1。Z1是一株有高产PQQ潜力的菌株，后续发酵罐培养和优化工艺将进一步提高PQQ产量。当甲醇浓度超过2.5%时，由于甲醇的毒性使细胞损伤，并且底物浓度过高抑制甲醇脱氢酶的活性，导致菌体OD600和PQQ产量下降。另外发现改变pH可以使PQQ有所保留，但峰形较差，且拖尾严重，并且不能很好分离样品发酵液中的PQQ。
氧化还原法中用到的显色剂氯化硝基四氮唑蓝（NBT）易受培养基中其他成分的干扰，造成阴性结果。当甲醇浓度逐渐提高时，细胞所能利用的碳源增加，菌体OD600和PQQ产量也逐渐增加。由下式计算荧光衰退曲线下的面积(AUC)，计算保护面积(NetAUC)，然后以NetAUC值为纵坐标，以TroloX溶液浓度为横坐标，建立标曲。
⑤量取100LFL稀释液置于96孔荧光板中，用酶标仪在激发波长490nm、发射波长514nm下测定荧光值(记作)。具体测定步骤如下：①准确称取AAPH0.414g，用75mmol／LpH7.4的磷酸缓冲液溶解并定容至10mL，即得153mmol／L的AAPH溶液。按下式计算ABTS清除率(IA)：IA(％)=(1-A1／Ao)100式中，A1：茶酒样液的吸光度。将单枞茶酒样品作一系列浓度地稀释，将每一稀释度样品溶液加到2支5mL试管中，每支试管加0.2mL样品液。
按下式计算DPPH清除率(ID)：ID(％)=[1～(A1A2)／Ao]100式中，A1：0.2mL茶酒样液+3.8mLDPPH乙醇溶液的吸光度。取7mmol／L的ABTS溶液5mL，加入到88L0.14mol／LK2S2O8溶液中，混匀，室温下避光静置12h，即得ABTS储备液。
如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：儿茶素，磷酸，邻苯三酚，水杨酸。由决定系数R2可知方程均拟合良好。取10mL小试管若干，分别加入4.5mLpH8.O的Tris-盐酸缓冲液，于30℃水浴中静置15min，在各试管中分别加入0.2mL不同浓度的单枞茶酒样品液以及30℃预热过的3mmol／L的邻苯三酚溶液0.3mL(用10mmo/L盐酸配制)，摇匀后于30℃水浴中静置5min，然后迅速加入5滴8mol/L盐酸终止反应。②测定ABTS清除能力参照Dudonne等的方法并作改进。
实验时分别吸取Trolox溶液l、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mL于10mL容量瓶，用75mmol/LpH7.4磷酸缓冲液定容，即得不同浓度Trolox溶液。然后在一支试管中加入110-4mol/L的DPPH乙醇溶液3.8mL，在另一支试管中加入3.8mL乙醇，两支试管充分摇匀后于室温下置于黑暗处孵育30min，然后于波长517nm处测定吸光度。然后将FL贮液甲和FL贮液乙置于4℃备用。将单枞茶酒样品液用dd水作一系列浓度地稀释。
（4）抗氧化能力指数(ORAC)的测定ORAC法是抗氧化研究领域关注较多的一种抗氧化活性评价方法，目前已成功应用于生物制品、食品、化学品及天然植物提取物等多种样品的抗氧化能力分析⑤量取100LFL稀释液置于96孔荧光板中，用酶标仪在激发波长490nm、发射波长514nm下测定荧光值(记作)。
按下式计算O2-清除率(Is)：Is(％)=(Ao-An)／Ao100式中，Ao：空白的吸光度。按下式计算ABTS清除率(IA)：IA(％)=(1-A1／Ao)100式中，A1：茶酒样液的吸光度。
实验前用10mmo/LpH7.4的磷酸缓冲液稀释成工作液，使其在波长734nm下吸光度为0.700.02。实验时分别吸取Trolox溶液l、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mL于10mL容量瓶，用75mmol/LpH7.4磷酸缓冲液定容，即得不同浓度Trolox溶液。A2：0.2mL茶酒样液+3.8mL乙醇的吸光度。将单枞茶酒样品液用dd水作一系列浓度地稀释。An：加入茶酒样液后的吸光度。然后，加入不同浓度的TroloX溶液50L并振摇2min，37℃下孵育8min后立即加入50LAAPH溶液启动反应。
An：加入茶酒样液后吸光度。取10mL小试管若干，分别加入4.5mLpH8.O的Tris-盐酸缓冲液，于30℃水浴中静置15min，在各试管中分别加入0.2mL不同浓度的单枞茶酒样品液以及30℃预热过的3mmol／L的邻苯三酚溶液0.3mL(用10mmo/L盐酸配制)，摇匀后于30℃水浴中静置5min，然后迅速加入5滴8mol/L盐酸终止反应。
按下式计算0H清除率(IH)：IH(％)=[1-(An-Ad)／Ao]100式中，Ao：空白吸光度。③准确称取2.5mgTrolox，用甲醇溶解并定容至10mL，即得1mmol／L的Trolox溶液。
如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：儿茶素，磷酸，邻苯三酚，水杨酸。实验时吸取FL贮液乙0.5mL并以磷酸缓冲液定容至25mL，可得810-3mmo儿的稀释液。
由下式计算荧光衰退曲线下的面积(AUC)，计算保护面积(NetAUC)，然后以NetAUC值为纵坐标，以TroloX溶液浓度为横坐标，建立标曲。用dd水作空白对照，在波长325nm处测定吸光度。（4）抗氧化能力指数(ORAC)的测定ORAC法是抗氧化研究领域关注较多的一种抗氧化活性评价方法，目前已成功应用于生物制品、食品、化学品及天然植物提取物等多种样品的抗氧化能力分析。由决定系数R2可知方程均拟合良好。
FeS04溶液2mL、8mmol／L水杨酸-乙醇溶液2mL以及不同浓度的单枞茶酒样品液2mL，以dd水作空白，最后加入8.5mol／LH202溶液2mL，摇匀后于40℃水浴中静置20min，然后4000r/min离心5min，取上清液于波长510nm处测定吸光度，参比溶液以dd水替代H2O2溶液。④量取单枞茶酒10mL置于lL容量瓶中，用75mmol/LpH7.4磷酸缓冲液定容，即得10mL/L的样品液。
反应期间，每隔2min便测一次荧光值(记作An)，直至荧光值衰减成直线。将单枞茶酒作一系列浓度地稀释，取10L样品液加到200LABTS工作液中，混匀并静置6min后测定波长405nm下的吸光度。
二、结果与分析1、单枞茶酒中儿茶素和GA测定结果表2为儿茶素和GA标品的标曲方程。④测定02-清除能力参考PaVithm等及候学敏等的方法并作改进。
吸取FL贮液甲0.05mL并以磷酸缓冲液定容至50mL，即得4.2510-3mmol／L的FL贮液乙。然后在一支试管中加入110-4mol/L的DPPH乙醇溶液3.8mL，在另一支试管中加入3.8mL乙醇，两支试管充分摇匀后于室温下置于黑暗处孵育30min，然后于波长517nm处测定吸光度。将单枞茶酒样品作一系列浓度地稀释，将每一稀释度样品溶液加到2支5mL试管中，每支试管加0.2mL样品液。③测定OH清除能力参考候学敏等的方法并稍作改进。
具体测定步骤如下：①准确称取AAPH0.414g，用75mmol／LpH7.4的磷酸缓冲液溶解并定容至10mL，即得153mmol／L的AAPH溶液。然后将FL贮液甲和FL贮液乙置于4℃备用。
图1为单枞茶酒中儿茶素和GA的HPLC分析图谱，表3为计算出的单枞茶酒中的儿茶素和GA含量。Ao：0.2mL乙醇+3.8mLDPPH乙醇溶液吸光度。
①测定DPPH清除能力参考Kumaran等及Floegel等的方法并作改进。声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。
